新方法 | 一种衍生条件测定磺酰氯中磺酸的检测方法-凯发k8旗舰厅
磺酰氯主要分为脂肪族磺酰氯和芳香族磺酰氯。芳香族磺酰氯的来源有以下几类:
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由硫酚,各种硫醚在酸性溶剂中导入氯气制得;
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芳香磺酸类化合物在氯化试剂作用下形成;
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磺化反应。脂肪族磺酰氯的来源主要是硫醇或相关衍生物氯代或氧化[1]。
在合成工艺中不可避免产生磺酸类的杂质。当前文献中磺酰氯类化合物磺酸检测方法有:
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正相高效液相色谱法[2],但磺酸类杂质在纯有机相中不易溶解,该方法存在较大局限性;
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常规反相高效液相色谱法[3],该方法磺酰氯类化合物易遇水反应生成磺酸类化合物。易造成检测结果偏高。
常规磺酸类杂质在磺酰氯中检测方法,有以下局限:
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磺酸类化合物极性大,在液相色谱中保留能力较弱,易受空白溶剂干扰;
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磺酸类化合物峰形易受稀释剂影响,容易产生溶剂效应;
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磺酰氯类化合物稳定性较差,易遇水反应生成磺酸类化合物,常规高效液相色谱法流动相中大多含有水,会造成检测结果不准确。
针对上述问题,本文以3-甲基-8-喹啉磺酰氯为例,开发出了一种采用氨水衍生的方法,用氨水衍生3-甲基-8-喹啉磺酰氯,形成比较稳定的酰胺,酰胺在水中不易降解成3-甲基-8-喹啉磺酸,并且3-甲基-8-喹啉磺酸与氨水在常规条件下不易生成酰胺(如下图所示),从而准确测定其中含有的磺酸,通过方法学验证,证明该方法可准确有效地检测3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的杂质3-甲基-8-喹啉磺酸。
从上图中可以看出,磺酸与磺酰氯衍生物磺酰胺分离度良好,且磺酸类杂质不与氨水反应生成酰胺,该方法可准确有效地检测磺酰氯化合物中磺酸类杂质。
高效液相色谱仪(waters、安捷伦)、电子天平(梅特勒xs105、奥豪斯arrw60)
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试药:3-甲基-8-喹啉磺酰氯(北京孚众科技有限公司)、3-甲基-8-喹啉磺酸(北京康派森医药科技有限公司)。
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试剂:磷酸二氢钾(分析纯,来源北京福晨科技有限公司)、庚烷磺酸钠(分析纯,来源麦克林生化试剂有限公司)、乙腈(色谱纯、来源fisher)、超纯水(自制)。
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色谱条件
1)色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
2)流动相a:10mmol/l磷酸二氢钾溶液和2.5mmol/l庚烷磺酸钠溶液(取磷酸二氢钾1.36g,1-庚烷磺酸钠0.51g,加水1000ml使溶解,用磷酸调节ph值至4.5)
3)流动相b:乙腈
4)检测波长:230nm
5)流速:1.0ml/min
6)柱温:30℃
7)进样量:20μl
8)洗脱梯度:
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溶液配制
1)对照品溶液:取3-甲基-8-喹啉磺酸适量,精密称定,加40%乙腈溶解并稀释制成每1ml含25μg的溶液。
2)供试品溶液:取3-甲基-8-喹啉磺酰氯约10mg,精密称定,置西林瓶中,加乙腈1ml和浓氨水0.05ml,振摇至完全反应,析出结晶,减压干燥至干后,加入乙腈8ml,水4ml溶解,转移至20ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀。
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测定法
精密量取上述溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。
计算公式:
注:w对:对照品溶液称样量,mg; w供试品:供试品称样量,mg; a对:对照品溶液色谱图中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面积; a杂质:供试品溶液色谱图中3-甲基-8-喹啉磺酸峰面积; v对:对照品溶液的稀释倍数; v供试品:供试品溶液的稀释倍数。
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专属性
对照品溶液中3-甲基-8-喹啉磺酸各色谱参数符合要求,空白溶剂不干扰3-甲基-8-喹啉磺酸检测,专属性良好。
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灵敏度试验
取3-甲基-8-喹啉磺酸适量,精密称定,加40%乙腈溶解后,用40%乙腈逐级稀释,配制成定量限及检测限溶液,分别精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。当峰高约为基线噪音的3倍或2倍,即为检测限;当峰高约为基线噪音的10倍时,即为定量限,结果如下表。
灵敏度试验结果
结论:3-甲基-8-喹啉磺酸定量限小于报告限度(0.05%)的50%,检测限小于定量限的0.5倍,方法灵敏度符合要求。
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进样精密度试验
取定量限溶液连续进样6针,照拟定方法检测,考察进样精密度,记录色谱图,结果如下表。
进样精密度试验
结论:定量限溶液连续进样6针,峰面积rsd<5.0%,保留时间rsd<2.0%,进样精密度符合要求。
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线性试验
取3-甲基-8-喹啉磺酸适量,精密称定,加40%乙腈溶解后,分别定量稀释配制成10%、5%、2%、1%、0.1%和0.001%的溶液,照拟定方法检测,记录色谱图,结果如下表。
线性试验结果
结论:3-甲基-8-喹啉磺酸在0.01~51.35μg/ml浓度范围内,r2>0.999,浓度与峰面积之间线性关系良好。
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准确度试验
用3-甲基-8-喹啉磺酸对照品配制0.5%、2%、5%、10%加样回收率溶液,来验证方法的准确性,测得3-甲基-8-喹啉磺酸的回收率在93.00%~105.80%范围内,平均回收率为99.4%,方法准确度较高。
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耐用性试验
本方法在流速0.8~1.2ml/min、柱温25~35℃、流动相a ph4.3~4.7、缓冲盐浓度在8~12mmol/l范围内,使用不同厂牌色谱柱和不同仪器,对照品溶液色谱峰各色谱参数均符合要求;供试品中3-甲基-8-喹啉磺酸检出量无明显差异;空白溶剂均不干扰检测,耐用性良好。
该衍生方法反应速度快,条件温和,便于实现。
通过全面的方法学验证,证明该方法具有专属性强、灵敏度高、准确度高的特点,可准确有效地检测3-甲基-8-喹啉磺酰氯中的杂质3-甲基-8-喹啉磺酸。
参考文献:
[1] 张国柱.经典化学合成反应标准操作-磺酰氯合成法[db/ol]
[2] 张亚梅.hplc法测定药物中间体5-磺酰氯异喹啉含量及有关物质[j].世界家苑2018年第09期
[3] 勾新磊,赵铁禅等.uplc-ms/ms法测定阿加曲班中4个基因毒性杂质[j].药物分析杂质2019年第11期
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